液相色譜基礎知識

色譜法也叫層析法，它是一種高效能的物理分離技術，將它用于分析化學并配合適當的檢測手段，就成為色譜分析法。（原    理：色譜法中存在兩相）

簡介

色譜法的最早應用是用于分離植物色素，其方法是這樣的：在一玻璃管中放入碳酸鈣，將含有植物色素（植物葉的提取液）的石油醚倒入管中。此時，玻璃管的上端立即出現幾種顏色的混合譜帶。然后用純石油醚沖洗，隨著石油醚的加入，譜帶不斷地向下移動，并逐漸分開成幾個不同顏色的譜帶，繼續(xù)沖洗就可分別接得各種顏色的色素，并可分別進行鑒定。色譜法也由此而得名。

但其分離的原理仍然是一樣的。我們仍然叫它色譜分析。

液相色譜原理

由以上方法可知，在色譜法中存在兩相，一相是固定不動的，我們把它叫做固定相；另一相則不斷流過固定相，我們把它叫做流動相。

色譜法的分離原理就是利用待分離的各種物質在兩相中的分配系數、吸附能力等親和能力的不同來進行分離的。

使用外力使含有樣品的流動相（氣體、液體）通過一固定于柱中或平板上、與流動相互不相溶的固定相表面。當流動相中攜帶的混合物流經固定相時，混合物中的各組分與固定相發(fā)生相互作用。

由于混合物中各組分在性質和結構上的差異，與固定相之間產生的作用力的大小、強弱不同，隨著流動相的移動，混合物在兩相間經過反復多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時間不同，從而按一定次序由固定相中先后流出。與適當的柱后檢測方法結合，實現混合物中各組分的分離與檢測。

液相色譜分類

色譜分析法有很多種類，從不同的角度出發(fā)可以有不同的分類方法。

從兩相的狀態(tài)分類：

色譜法中，流動相可以是氣體，也可以是液體，由此可分為氣相色譜法（GC）和液相色譜法（LC）。固定相既可以是固體，也可以是涂在固體上的液體，由此又可將氣相色譜法和液相色譜法分為氣-液色譜、氣-固色譜、液-固色譜、液-液色譜。

另外，還有一種超臨界流體色譜法（supercritical fluid chromatography SFC），超臨界流體色譜是指用超臨界流體做流通相，以固體吸附劑（如硅膠）或鍵合到載體（或毛細管壁）上的高聚物為固定相的色譜法。超臨界流體是在高于臨界壓力和臨界溫度時的一種物質狀態(tài)，它既不是氣體也不是液體，但兼有氣體和液體的某些性質（藥物色譜分析 主編丁黎 人民衛(wèi)生出版社2008年7月第一版）。

高效液相色譜法（HPLC）是繼氣相色譜之后，70年代初期發(fā)展起來的一種以液體做流動相的新色譜技術。

高效液相色譜是在氣相色譜和經典色譜的基礎上發(fā)展起來的。現代液相色譜和經典液相色譜沒有本質的區(qū)別。不同點僅僅是現代液相色譜比經典液相色譜有較高的效率和實現了自動化 操作。經典的液相色譜法，流動相在常壓下輸送，所用的固定相柱效低，分析周期長。而現代液相色譜法引用了氣相色譜的理論，流動相改為高壓輸送（最高輸送壓力可達4.9′107Pa）;色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經典液相色譜（每米塔板數可達幾萬或幾十萬）；同時柱后連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進行連續(xù)檢測。因此，高效液相色譜具有分析速度快、分離效能高、自動化等特點。所以人們稱它為高壓、高速、高效或現代液相色譜法。

HPLC 系統(tǒng)一般由高效液相色譜儀主要由進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數據處理系統(tǒng)等組成。

其中高壓輸液泵、色譜柱、檢測器是關鍵部件。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機、自動進樣器、預柱或保護柱、柱溫控制器等，現代 HPLC 儀還有微機控制系統(tǒng)，進行自動化儀器控制和數據處理。制備型 HPLC 儀還備有自動餾分收集裝置。

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